自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：A.制备稀释倍数为102

自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：
A.制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。
B.为了得到更加准确的结果，你选用 (稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。
C.适宜温度下培养。
结果分析：
（1）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是　
A.一个平板，统计的菌落数是23
B.两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24
C.三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26
D.四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25
（2）一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL)　 。
（3）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量　 （1分），因为　 　 。
（4）某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？　 （1分），为什么？　 。

(答案→) 解析：平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法又分为稀释涂布平板法和稀释混合平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布在固体培养基的表面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化并冷却至45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾倒入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出现菌落。 在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。由于大肠杆菌属于兼性厌氧菌，为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌落数计算的平板越多，其平均值越接近实际值。但是C选项中出现一个菌落数只有5的结果，不可信，因此答案选D。计算公式：每克样品中的菌株数＝C/V×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表稀释平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一是大肠杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污染了。

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