为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现？

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解决时间 2021-02-26 21:40

提问者网友：焚苦与心
2021-02-26 18:33

为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现？怎么解决呢

最佳答案

五星知识达人网友：几近狂妄
2021-02-26 19:37

博凌科为-为你解答：1.反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。2.检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。3.引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。4.引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。5.模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。6.模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

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1楼网友：神的生死簿
2021-02-26 19:50

博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般sg法采用72℃延伸时采集,taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号.3.引物或探针降解.可通过page电泳检测其完整性.4.引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况.5.模板量不足.对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起.6.模板降解.避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况.

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