有关SF9细胞培养是否出现污染

有关SF9细胞培养是否出现污染

细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。
　　培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
　　培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
　　支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素有抗药性，多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。

sf9细胞生长条件：27℃、无需co2、既可悬浮生长也可贴壁生长、培养基sf-900ⅱ（无血清）。悬浮培养时把细胞在悬浮培养瓶中，要有滚动装置（若无上述装置可把培养瓶放在小摇床上<200rpm摇振陪养）。贴壁培养时可把细胞在悬浮培养瓶中直接静置30-60分钟即可贴壁，传代时不用消化，用吸管轻轻吹打即可使细胞脱落下来，一般三天传一次代。

就我个人经验，悬浮培养更方便，细胞生长状态也不错。尤其对刚复苏的细胞最好先进行悬浮培养。待细胞长满或需要细胞时，用吸管把细胞吸入离心管中，1000转离心5分钟，然后弃掉上清，用手指将离心管中的细胞弹打均匀，加新培养基，吹打均匀即可分到另外一瓶中。原来瓶中可再加新培养基继续摇振陪养。

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