BCA蛋白浓度检测的实验试剂

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解决时间 2021-03-23 08:44

提问者网友：我是女神我骄傲
2021-03-22 16:59

BCA蛋白浓度检测的实验试剂

最佳答案

五星知识达人网友：时间的尘埃
2021-03-22 18:20

Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu 2+ 络合并将Cu 2+ 还原成Cu + 。两分子BCA与一个Cu + 螯合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
组成与储存：
组分名称规格保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA标准液5 mg/ml 1ml -20ºC冻存
可进行500T微板(microplate)测定或50T2ml比色杯测定。

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1楼网友：雪起风沙痕
2021-03-22 19:16

(1) BCA试剂的配制
① 试剂A，1L：分别称取10g BCA (1%)，20g Na2CO3·H2O(2%)，1.6g Na2C4H4O6·2H2O(0.16%)，4g NaOH (0.4%) ，9.5g NaHCO3(0.95%) ，加水至1L，用NaOH或固体NaHCO3调节pH值至11.25。
②试剂B，50ml：取2g CuSO4·5H2O (4%)，加蒸馏水至50ml。
③BCA试剂：取50份试剂A与1份试剂B混合均匀。此试剂可稳定一周。
(2)标准蛋白质溶液：称取0.5g牛血清白蛋白，溶于蒸馏水中并定容至100ml，制成5mg/ml的溶液。用时稀释十倍。

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