BL21保存的质粒会使histag标签丢失吗?
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解决时间 2021-02-28 05:58
- 提问者网友：愿为果
- 2021-02-27 09:58
BL21保存的质粒会使histag标签丢失吗?
最佳答案
- 五星知识达人网友：神的生死簿
- 2021-02-27 11:14
大家好，我实验过程中需要做几个抗体（这些是一抗），向老外咨询制作过程，回信说
The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse.
因为我做的是两大类蛋白，姑且以A和B代替。
我看老外的意思是要我分别克隆一段特殊的序列（这个序列我知道，就是我的蛋白的其中一段），然后加上 His-tag（组氨酸标签）在E. coli 中表达，然后再提取纯化蛋白后在兔子或老鼠中获得抗体？
这中间有个问题，怎么加上 His-tag（组氨酸标签）？是直接设计引物引进 His-tag（组氨酸标签），还是按照有些人说的转到PET-30a这样还有 His-tag（组氨酸标签）的载体上获得？
请问有没有同学做过加 His-tag（组氨酸标签）的实验啊，请指教啊！
The best is to subclone the hydrophilic loop of A proteins or cytoplasmic region of B proteins, express in the E. coli with His-tag, purify the protein and send it for immunization in Rabbit or Rat or Mouse.
因为我做的是两大类蛋白，姑且以A和B代替。
我看老外的意思是要我分别克隆一段特殊的序列（这个序列我知道，就是我的蛋白的其中一段），然后加上 His-tag（组氨酸标签）在E. coli 中表达，然后再提取纯化蛋白后在兔子或老鼠中获得抗体？
这中间有个问题，怎么加上 His-tag（组氨酸标签）？是直接设计引物引进 His-tag（组氨酸标签），还是按照有些人说的转到PET-30a这样还有 His-tag（组氨酸标签）的载体上获得？
请问有没有同学做过加 His-tag（组氨酸标签）的实验啊，请指教啊！
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