哪一种裂解液对核蛋白的提取好点
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解决时间 2021-11-20 22:33
- 提问者网友：了了无期
- 2021-11-19 22:53
哪一种裂解液对核蛋白的提取好点
最佳答案
- 五星知识达人网友：低音帝王
- 2021-11-19 23:45
ripa裂解液对核蛋白的提取好点。加到细胞培养皿里面，摇15分钟，然后刮下来吸出来，是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。
裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
全部回答
- 1楼网友：渊鱼
- 2021-11-20 00:35
核蛋白提取：
细胞经PBS洗涤后，悬浮在缓冲液A中 即10mM HEPES,pH 7.9，10mM KCl,0.1mM EDTA,0.2% NP40,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin.
混匀后冰置15min，加入10% NP40 25微升
剧烈震荡15秒，13000 rpm离心10秒
吸弃上清，加入缓冲液C 即20mM HEPES,pH 7.9，420mM NaCl,0.1mM EDTA,1.5mM MgCl,25% Glycerol,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin.
冰置30min，剧烈震荡15秒，12500rpm离心10分钟取上清
细胞经PBS洗涤后，悬浮在缓冲液A中 即10mM HEPES,pH 7.9，10mM KCl,0.1mM EDTA,0.2% NP40,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin.
混匀后冰置15min，加入10% NP40 25微升
剧烈震荡15秒，13000 rpm离心10秒
吸弃上清，加入缓冲液C 即20mM HEPES,pH 7.9，420mM NaCl,0.1mM EDTA,1.5mM MgCl,25% Glycerol,1mM DTT,0.1mM PMSF,1mg/L Leupeptin、antipain、aprotinin和pepstatin.
冰置30min，剧烈震荡15秒，12500rpm离心10分钟取上清
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