如何从组织中提取核蛋白
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解决时间 2021-03-28 10:09
- 提问者网友：沦陷
- 2021-03-28 01:42
如何从组织中提取核蛋白
最佳答案
- 五星知识达人网友：蓝房子
- 2021-03-28 02:27
你看看：
Buffer A: HEPES (pH 7.9) 0.28698g
1M MgCl2 0.15ml
1M KCl 1ml
H2O to 100ml
Buffer B HEPES (pH 7.9) 0.57396g
1M MgCl2 0.15ml
NaCl 2.45448g
(10mM) EDTA 2ml
Glycerol 25ml
H2O to 100ml
Buffer C: HEPES pH 7.9 20mM
MgCl2 1.5mM
NaCl 420mM
EDTA 0.2mM
Glycerol 25%,v/v
用前加入0.5ul 1M的DTT，2ul 100mM的PMSF以及在每ml Buffer中加入10ul 蛋白酶抑制剂。
100 mM PMSF：174.2mg PMSF+10ml 水
步骤为：
1． 用冷-PBS洗两次细胞
2． 刮除细胞入1ml -PBS中
3． 离心细胞3000rpm，5分钟
4． 用400ul Buffer A重悬细胞，并上肿胀细胞10分钟，vortex10秒
5． 1000rpm离心10秒，弃上清
6． 12000rpm离心5分钟，弃上清
7． 重悬细胞在50-100ul Buffer C中，置于冰上20分钟
8． 12000rpm离心5分钟，转移上清于另一EP管中
9． 定蛋白，分装于-70℃保存
Buffer A: HEPES (pH 7.9) 0.28698g
1M MgCl2 0.15ml
1M KCl 1ml
H2O to 100ml
Buffer B HEPES (pH 7.9) 0.57396g
1M MgCl2 0.15ml
NaCl 2.45448g
(10mM) EDTA 2ml
Glycerol 25ml
H2O to 100ml
Buffer C: HEPES pH 7.9 20mM
MgCl2 1.5mM
NaCl 420mM
EDTA 0.2mM
Glycerol 25%,v/v
用前加入0.5ul 1M的DTT，2ul 100mM的PMSF以及在每ml Buffer中加入10ul 蛋白酶抑制剂。
100 mM PMSF：174.2mg PMSF+10ml 水
步骤为：
1． 用冷-PBS洗两次细胞
2． 刮除细胞入1ml -PBS中
3． 离心细胞3000rpm，5分钟
4． 用400ul Buffer A重悬细胞，并上肿胀细胞10分钟，vortex10秒
5． 1000rpm离心10秒，弃上清
6． 12000rpm离心5分钟，弃上清
7． 重悬细胞在50-100ul Buffer C中，置于冰上20分钟
8． 12000rpm离心5分钟，转移上清于另一EP管中
9． 定蛋白，分装于-70℃保存
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