用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆，经抗生素筛选为何会出现假阳性？如何防止假 阳性的产生？

用质粒载体进行外源 DNA 片段克隆，经抗生素筛选为何会出现假阳性？如何防止假 阳性的产生？

质粒被切以后，和目的基因放在一个体系中，加入DNA连接酶，有可能质粒在切口处重新接上。这样的 质粒上面有标记基因，但没有目的基因。因此，这样的质粒导入受体细胞后也有抗性。这就是假阳性。还有一种假阳性，就是目的基因和质粒在连接时，方向接反了。如何防止假阳性，方法有三种。第一，用同尾酶去切，可防止质粒自身环化；第二、用双标记基因法，如抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因两个标记基因，这个方法一句话给你说不清楚，先简单了解一点；第三、用基因探针去检测，这个方法是最可靠的。

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