我用酚氯仿法提取DNA，可是提取的DNA琼脂糖电泳还行，但是一直PCR不出东西，求原因

答案:2 悬赏:70 手机版

解决时间 2021-11-29 01:47

提问者网友：骨子里的高雅
2021-11-28 17:09

最佳答案

五星知识达人网友：大漠
2021-11-28 17:22

PCR没有产物一般问题出在模板质量上。不知道楼主蛋白抽提的是否干净，建议减少模板的用量，或者用酚仿多抽提几次。
另外建议检查引物是否存在问题，是否和染色体上非特异序列同源性太高，特别是3‘端追问我做的是软体动物线粒体COΙ基因的克隆，用的是通用引物，引物应该是没有问题，应该减少模版的量吗，难道是模版数量太多了吗，抽提次数应该是越多，模版的量越少吧，求解啊

追答要知道原则上PCR可以将单拷贝模板扩增至肉眼可见，所以模板的量完全不用担心不够。反而由于模板量太多导致杂质过多、扩增效率过低的情况很常见。
楼主可以试一试。追问好的，3Q，分给你了追答上图电泳中如果是5ul上样量的话，建议做PCR时 50 ul体系中只加0.5 ul或者更少

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1楼网友：想偏头吻你
2021-11-28 18:42

换个引物。。。追问我做的是软体动物线粒体COΙ基因的克隆，用的是通用引物，引物应该是没有问题，应该减少模版的量吗，难道是模版数量太多了吗，抽提次数应该是越多，模版的量越少吧，求解啊追答目的条带多大啊你这在1K的地方不是有条带么就是跑的丑了点追问那个图是我提取的DNA追答基因组DNA 这个提的也太不好了吧。。。追问用酚氯仿提的，为什么不能用啊？就是单纯提的不好吗，提取的时候要怎么弄啊

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