如何提高连接效率

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解决时间 2021-02-11 13:17

提问者网友：缘字诀
2021-02-11 05:01

如何提高连接效率

最佳答案

五星知识达人网友：老鼠爱大米
2021-02-11 05:24

有几个问题：
1. 载体上ECOR I 和 Sal I 位点距离会不会太近？一般来说两个克隆位点如果相距太近，会影响酶切效率，导致只有一个位点切开。
2. 载体酶切时条件掌握得好不好，酶切时间会不会太短？如果酶切条件不好，会使载体酶切不完全。
3. 感受态细胞的体积是不是考虑搞多一些，否则酶切体系里的甘油会影响转化效率。
4. 载体的抗性基因是不是搞错了，是卡那抗性还是氨苄抗性。

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1楼网友：孤独的牧羊人
2021-02-11 05:43

1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 3、足够多的载体和插入片段是最重要的。生物帮上面有这方面的专题介绍，原位杂交,荧光原位杂交,荧光原位杂交技术,荧光原位杂交原理,荧光原位杂交步骤,原位杂交试剂盒,荧光原位杂交探针,荧光原位杂交应用。

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