PCR产物作为模板继续PCR反应，稀释前后产物不同，怎么回事？

答案:2 悬赏:80 手机版

解决时间 2021-11-24 18:42

提问者网友：捧腹剧
2021-11-24 08:01

最佳答案

五星知识达人网友：零点过十分
2021-11-24 09:22

A根本没P出来呗那个条带就是你加进去的模板模板浓度太高了光是模板跑胶的亮度跟你目的条带扩增出来的都一样了追问我算了一下，按照你说的，A就是相当于作为模板的一次PCR产物被稀释了100倍后电泳，会有这么亮的条带吗？我算了一下，按照你说的，A就是相当于作为模板的一次PCR产物被稀释了100倍后电泳，会有这么亮的条带吗？追答分子量越大能结合上的染料越多所以即使数量少也会比低分子量的更容易亮一些

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1楼网友：蓝房子
2021-11-24 10:35

这种情况是很常见的，通常只有第一次PCR的产物质量非常高的情况下才能不稀释直接作为第二次PCR的模板还有好的效果，况且第一轮PCR的产物中会有很多不需要的组分，因此第一轮的产物通常都要进行稀释后作为第二轮的模板，稀释100倍是起步，另外你的PCR体系模板量太大了，10%的模板是很多的，会引入大量第一次PCR的杂质，一般加1~2微升即可。另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好

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